论文分子检测显示6个彩色马铃薯品种为常规品种是适合马铃薯论文写作的大学硕士及相关本科毕业论文，相关马铃薯销售开题报告范文和学术职称论文参考文献下载。
摘要：本研究收集了6个彩色马铃薯品种,根据转基因技术原理,采用聚合酶链式反应技术（PCR）,用马铃薯转基因常用35S 启动子和筛选标记卡那霉素基因特异引物分析了彩色马铃薯是否为转基因马铃薯品种.试验结果表明,6个彩色马铃薯品种PCR 扩增结果均为阴性,表明这些彩色品种并非转基因品种,这些品种实际上是经过常规杂交选育而成.
关键词：彩色马铃薯;转基因;分子检测
马铃薯富含大量优质淀粉、纤维素、蛋白质和人体必需的8种氨基酸,富含维生素C 和多种B族维生素,钙、磷、镁、钾含量也很高,还含有微量元素,是一种健康营养的蔬菜[1].随着我国人民生活水平的提高和膳食结构的改善,马铃薯越来越受到广大消费者和市场的青睐.近年来一些彩色马铃薯在市场上流行起来,彩色马铃薯含有大量的纯天然花青素和绿原酸等多酚类抗氧化活性物质,具有抗氧化、抗衰老功能,是集营养、保健和天然色素于一体的新品种,成为很多消费者追捧的健康美食[2].
随着转基因技术的发展,一些转基因植物被释放.目前我国共批准发放7种转基因作物安全证书,分别是抗虫棉花、改变花色矮牵牛、耐储存番茄、抗病辣椒、抗病番木瓜、转植酸酶玉米和抗虫水稻[3].但实现大规模商业化生产的只有抗虫棉和抗病毒木瓜,抗病辣椒和耐储存番茄在生产上并未被消费者接受,故未实现商业化种植,而抗虫水稻和转植酸酶玉米未完成后续的品种审定,未进行商业化种植[3].
转基因一般用农杆菌作表达载体,载体上有一个可转移“T-DNA”区段,该区段最后插入植物基因组中,转基因过程会在植物基因组中留下“痕迹”[4,5].一般在 “T-DNA”区段包含2个表达框架,一个是在35S 启动子驱动下的目的基因表达框架,一个是选择标记基因表达框,马铃薯转基因研究一般用卡那霉素抗性基因.理论上马铃薯转基因如果用了35S 启动子和卡那霉素抗性基因,转基因植株中就会含有这些区段.分子检测手段是国际上进行转基因鉴定的通行做法.
因对转基因技术不了解或存在安全顾虑,再加上一些不明真相的人有时散发一些谣言,到处传播彩色马铃薯是通过转基因得到的,广大民众为此产生困惑.尽管世界上一些科学家正在进行马铃薯转基因研究,但目前世界上还没有转基因马铃薯获得环境释放和大面积栽培.为了释疑公众对彩色马铃薯是否是转基因产品的疑惑,选了6个彩色马铃薯品种或品系,利用灵敏的分子生物学方法通过探测“痕迹”有无来确认品种是否为转基因马铃薯.
1材料和方法
1.1试验材料
试验材料为6个马铃薯品种,分别为紫云1号（紫皮紫肉）、转心乌（紫皮紫肉）、华彩1号（红皮红肉）、黑玫瑰（紫皮紫肉）、River John Blue（紫皮紫肉）、Purple Congo（紫皮紫肉）,均为华中农业大学湖北马铃薯工程技术研究中心保存,对照为早大白（白皮白肉）和夏波蒂（黄肉）.
1.2块茎DNA 抽提
从每个洗净的马铃薯薯块上用打孔器取下一个长条,切取100 mg 薯肉放于2 mL 离心管中,然后加入2% CTAB DNA抽提缓冲液300 μL（2% CTAB,1.4 mol/L NaCl,20 mmol/L EDTA,100 mmol/L Tris-HCl,pH值 8.0）,4 μL β-巯基乙醇,放入1个小瓷珠,用磨样机进行破碎,5 m/s×5 s 3次,破碎完后在 65℃水浴锅中水浴1 h,期间每隔15 min摇动1次.待冷却至室温后,12 000 r/min离心10 min,吸取上清液,加入等体积的氯仿∶异戊醇（24∶1）轻轻摇动混匀,12 000 r/min离心15 min.吸取上清液到新的 1.5 mL离心管中,加入等体积冰冷的异丙醇,摇匀,-20℃沉淀1 h.12 000 r/min 4℃离心10 min,去上清液,可见离心管底部有白色沉淀,用1 mL 75% 乙醇洗涤沉淀1～2次,室温下干燥,溶于100 μL ddH2O 中.最后用电泳方法检测 DNA 质量.
1. CR 扩增
引物设计：35S启动子（35S-F：5"-CAGAACTCGCCGTAAAGACT-3",35S-R：5"-GCGTCATCCCTTACGTCAGTG-3",产物430 bp）和卡那霉素抗性基因特异引物（NPTⅡF：5"-AGACAATCGGCTGCTCTGAT-3",NPTⅡR：5"-TCATTTCGAACCCCAGAGTC-3",产物676 bp）进行扩增.β-tubulin特异引物（Tub-F：5"-TGGACAGTCTGGTGCTGGGA-3"和Tub-R：5"-GCCAGGGAATCTCAAACAG-3",产物456 bp）作为检测PCR反应的内参.
PCR扩增：在PCR 管中加入各种试剂,20 μL体系：10× Buffer with MgCl2 2 μL,dNTPs （2 mmol/L） 2 μL,左右引物（2 mmol/L）各1 μL,DNA模板1 μL,不足部分用ddH2O补充.最后滴1滴矿物油覆盖,放在Biometra II PCR仪上自动扩增,扩增循环：预热95℃,5 min;变性94℃,30 s;退火56℃,30 s;延伸72℃,1 min;32 个循环（变性-退火-延伸）;最后一次延伸72℃,5 min;保育10℃,停止.PCR扩增产物在1%的琼脂糖凝胶上电泳检测.
2结果和分析
2.1DNA 抽提和检测结果
马铃薯 DNA抽提完毕溶解于ddH2O 中,由于抽提薯块有色素,抽提DNA 沉淀溶解后稍有一些颜色.取出8 μL电泳,在凝胶成像系统下观察,所有材料都有一个亮带（图1）,确认所有马铃薯 DNA 都抽提成功.将 DNA稀释10倍用于PCR扩增.
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参考文献：
1、 盘县马铃薯品种比较试验 摘要 为了筛选出适宜贵州省种植的高产、优质、抗逆性强、商品性状较好的马铃薯品种，盘县试验点2014年对贵州省新育成（引进）的13个马铃薯品种（品。
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4、 Module1—6综合检测题 本试卷分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题）两部分。满分150分；时间120分钟。第Ⅰ卷（选择题，共95分）第一部分 听力（共两节，满分3。
5、 必修二Module1—6综合检测题 本试卷分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题）两部分。满分150分;时间120分钟。第Ⅰ卷（选择题，共90分）第一部分 听力（共两节，满分30。
6、 Module1—6检测题 本试卷分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题）两部分。满分150分；时间120分钟。第Ⅰ卷（选择题，共90分）第一部分 听力（共两节，满分30。