论文海南竹柏扁枝病病原植原体分子检测鉴定是适合不知如何写竹柏方面的相关专业大学硕士和本科毕业论文以及关于竹柏的寓意是什么论文开题报告范文和相关职称论文写作参考文献资料下载。
摘 要 提取采自海南万宁热带植物园中表现典型扁枝症状的竹柏植株总DNA,利用植原体16S rRNA基因通用引物对P1/P7和R16F2n/R16R2进行巢式PCR检测.结果表明：扩增到大小约1.2 kb的植原体特异片段,通过对扩增片段进行克隆、测序和序列比对分析,结果确定为植原体感染.系统进化分析结果表明,该植原体（GenBank登录号：KP027298）为australasiae植原体候选种相关株系,和australasiae植原体候选种（GenBank 登录号：Y10097）的同源性为99.4%.进一步虚拟RFLP分析,结果表明该植原体属于花生丛枝植原体组（16Sr II）的一个新亚组,和其相似性最高的是16Sr II-A亚组（相似系数为0.97）.为指导竹柏扁枝病的防治奠定理论依据.
关键词 竹柏；扁枝病；植原体；分子鉴定；16S rRNA
中图分类号 S432.1 文献标识码 A
Abstract In this paper, universal primers of P1/P7 and R16F2n/R16R2 for phytoplasmal 16S rRNA gene were used to detect phytoplasma by nested PCR respectively. The 1.2 kb DNA fragments were amplified from the total DNA of Podocarpus nagi（Thunb.）Zoll. et Mor ex Zoll with fasciation disease symptoms, which were collected from the Tropical Botanical Garden, Wanning, Hainan. Sequence analysis determined that the P. nagi with fasciation disease was caused by a phytoplasma（GenBank accession： KP027298）, which shared 99.4% similarity of the ‘Candidatus Phytoplasma australasiae’reference strain（GenBank accession： Y10097）. Furthermore, virtual RFLP analysis showed that the phytoplasma belonged to to a new subgroup within the peanut witches’-broom（16Sr II）group, the most similar was the reference pattern of the 16Sr group II, subgroup A（GenBank accession： L33765）, with a similarity coefficient of 0.97. The study is important for effective prevention of the disease.
Key words Podocarpus nagi；Fasciation；Phytoplasma；Molecular identification；16S rRNA
植原体是一种无细胞壁的植物病原细菌,被归类于细菌界（Bacteria）软壁菌门（Tenericutes）柔膜菌纲（Mollicutes）非固醇菌原体目（Acholeplasmatales）非固醇菌原体科（Acholeplasmataceae）植原体暂定属[Candidatus（Ca.）genus Phytoplasma][1].植原体中的G-C含量低,寄生于植物韧皮部筛管细胞中,通过破环植物体内激素的平衡,削弱氨基酸和碳水化合物的转运,抑制光合作用,加速衰老,诱导病害症状产生[2-5],感病植株的典型症状有黄化、丛枝、簇生、花变叶、矮化、小叶等[6],主要通过叶蝉、飞虱等昆虫媒介进行传播[6-7].植原体是许多植物病害的重要病原,迄今为止,全世界已报道的植原体病害超过1 000多种,造成巨大的经济损失.由于植原体无法分离培养,所以,不能通过常规的微生物分类方法进行分类鉴定,但随着分子生物学技术的快速发展,利用PCR方法扩增植原体的保守序列16S rRNA,并通过序列比对和RFLP分析能有效的对植原体进行鉴定和分类[8].
RFLP分析是通过一个基于16S rRNA基因进行植原体快速分类鉴定的在线工具-iPhyClassifier在线进行序列同源性分析.模拟实验室限制性内切酶消化和凝胶电泳并生成虚拟限制性片段长度多态性图像文件；能实现IRPCM植原体/螺原体工作小组建立的植原体候选种分类方法[8]和Wei等[9]提出的16Sr组和亚组的分类标准,根据计算整个序列的同源性分数和RFLP模型的相似系数,立即对植原体候选种的分配和植原体16Sr组分类地位的假定给出建议.iPhyClassifier将序列同源性分数97.5%作为划分植原体候选种的临界值,RFLP模型相似系数0.85、0.97分别作为划分植原体16Sr 组和亚组的临界值[9].当提交的16S rRNA基因序列同源性分数小于97.5%时,建议该植原体可代表一个新的植原体候选种；大于或等于97.5%时,建议为某一植原体候选种的相关株系.RFLP模型的相似系数小于或等于0.85时,建议该植原体可代表新的植原体16Sr组；相似系数大于0.85但小于或等于0.97时,建议该植原体可代表新的植原体16Sr亚组或已有16Sr亚组的不同株系或变种[10].根据已经报道的16S rRNA序列,RFLP分析可将植原体分为32个组,有效地提高了基于16S rRNA基因序列的植原体分类系统[11].
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参考文献：
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