论文石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测价值评价是关于对不知道怎么写石蜡论文范文课题研究的大学硕士、相关本科毕业论文石蜡论文开题报告范文和文献综述及职称论文的作为参考文献资料下载。
【摘 要】 目的 探讨分析石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测的价值.方法 63份经石蜡包埋的组织, 随机分为实验组（32份）和对照组（31份）.实验组采用DNA快速提取法, 对照组采用试剂盒DNA提取法.分别对两组提取出的DNA进行对比分析.结果 实验组在小组织标本中提取DNA的浓度及纯度均低于对照组；实验组在大组织标本中提取DNA的浓度及纯度与对照组比较无显著差异.对照组中提取的DNA扩增后可达到500 bp以上, 实验组扩增产物则在400 bp以上.结论 分子病理检测中应用石蜡包埋组织DNA快速提取法, 可在保证质量的情况下, 大大缩短检测时间, 提高检测安全性, 临床上值得应用.
【关键词】 分子病理检测；石蜡包埋组织；DNA快速提取法；价值
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.24.118
近年来, 随着分子病理学的不断发展, 人们对肿瘤疾病的认识与研究不再局限于患者的器官、细胞, 而是延伸到了蛋白质、DNA等水平.分子病理学使病理诊断变得更加准确、客观, 而且在肿瘤的治疗及预后等方面也有着重要价值, 其中免疫检测、基因检测、流式细胞术等技术目前应用较为广范, 全面推动着医疗技术的发展[1].提取DNA是分子病理检测的重要内容, 本研究通过对石蜡包埋组织进行DNA提取、分析, 旨在评价石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测中的价值, 现报告如下.
1 材料与方法
1. 1 材料 选取2016年3～12月经石蜡包埋的组织63份, 将其随机分为实验组（32份）和对照组（31份）.所有标本均使用中性甲醛固定, 其中淋巴结、肿瘤、宫颈组织各21份.
1. 2 方法
1. 2. 1 实验组 采用DNA快速提取法, 对每例标本制作4张蜡片, 首先将蜡片置入离心管中并加入裂解液, 采用金属浴方法将石蜡溶解, 并将温度控制在95℃, 持续时间在10 min左右, 然后以14000 r/min对其进行离心操作, 离心过程持续5 min, 最后将蜡层下出现的清凉溶液置于-20℃环境下保存.
1. 2. 2 對照组 采用试剂盒DNA提取法, 与实验组相同方法制作4张蜡片, 将其置入离心管中并加入二甲苯1 ml, 14000 r/min对其进行离心操作, 3 min后抛除上层清亮液体, 重复操作1次；1 ml无水乙醇加入离心管中, 混匀后重复上述离心操作, 并再次进行乙醇去苯, 完成后开盖蒸发乙醇；将Buffer ALT及蛋白酶K混入离心管, 混匀后进行消化、孵育；使用离心柱9000 r/min对其进行离心, 2 min后将废液丢弃；加500 μl缓冲液AW1, 9000 r/min对其进行离心, 2 min后将废液丢弃；加500 μl缓冲液AW2, 9000 r/min对其进行离心, 2 min后将废液丢弃；加入ATE静置2 min, 再离心处理；处理完毕后管内剩余液体置于-20℃环境下保存[2].
1. 3 DNA产物评价
1. 3. 1 DNA浓度及纯度 利用紫外分光光度计评价提取物DNA浓度及其纯度.
1. 3. 2 PCR可行性 对提取出的DNA进行PCR扩增（实验组使用DNA原液, 对照组DNA浓度65 ng/μl）；反应温度：预变性95℃, 变性95℃, 退火60℃；反应时间：预变性7 min, 变性45 s, 退火45 s；经循环35次后对其进行电泳处理, 并经BIO-RAD系统对两组DNA质量进行分析.
2 结果
2. 1 提取物DNA浓度及纯度评价 实验组在小组织标本中提取DNA的浓度及纯度均低于对照组；实验组在大组织标本中提取DNA的浓度及纯度与对照组比较无显著差异.
2. 2 PCR可行性对比分析 对照组中提取的DNA扩增后可达到500 bP以上,实验组中不同组织提取的DNA扩增产物大小不同,其中宫颈组织可达300 bp,其余组织则在400 bp以上.见图1.
3 讨论
随着科学技术的持续发展及医疗水平的不断进步, 石蜡包埋组织因其具有便于运输储存、交叉污染少等优点, 被广泛应用于临床病理工作中[3-6].在进行分子病理检测时提取DNA的方法中, 酚-氯仿法应用较早, 但因其操作过程复杂, 且对人体有损害等缺点, 目前已逐渐被离心柱法所代替[3].离心柱法对操作者要求相对较低, 且得到的DNA质量较高, 但检测过程中因为需要对组织进行消化, 操作步骤较多, 所以检测所需时间较长, 且在操作过程中换管频繁, 增加了标本污染的可能性[4].如何能够在保证DNA提取质量的情况下缩短操作时间, 成为了研究的热点问题之一.
石蜡包埋组织DNA快速提取法无需应用有毒试剂, 如二甲苯、氯仿等, 能够更好地保障检测人员的身体健康及生命安全[7-11]；采用离心管, 不但较通常所应用的PCR管方便许多, 而且可有效降低交叉污染的可能性, 从而提高DNA提取质量；将加热温度设置为95℃, 可有效避免过高的温度所造成的试管爆炸, 大大提高操作安全性[12-14].石蜡包埋组织在处理过程当中, 会经过甲醛固定以及脱水等步骤, 在进行分子病理检测之前已放置了一定的时间, 所以DNA断裂情况较为常见.有研究结果表明, DNA快速提取法所得到的DNA完全可用于PCR扩增[5].为进一步探讨分析石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测价值, 本实验对石蜡包埋组织进行了分组实验研究.
本实验研究结果显示, 实验组在小组织标本中提取DNA的浓度及纯度均低于对照组；实验组在大组织标本中提取DNA的浓度及纯度与对照组比较无显著差异.对照组中提取的DNA扩增后可达到500 bp以上, 实验组扩增产物则在400 bp以上.
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参考文献：
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