论文贵州烤烟糖苷类化学成分抗氧化活性分离鉴定是适合不知如何写烤烟方面的相关专业大学硕士和本科毕业论文以及关于种植什么最赚钱论文开题报告范文和相关职称论文写作参考文献资料下载。
摘 要：为深入研究烟草糖苷类化学成分及其抗氧化活性,以贵州烤烟为材料,首先用有机溶剂甲醇回流提取和大孔树脂吸附法获得糖苷类化学成分粗提物,对糖苷粗提物不同溶剂萃取物的清除DPPH自由基活性进行研究,再应用反相色谱、凝胶色谱、半制备液相色谱及薄层层析等技术,对清除自由基活性最好的组分进行进一步分离纯化.结果表明,糖苷粗提物不同溶剂萃取物均表现一定的清除DPPH自由基活性,其中乙酸乙酯部分活性最好.从乙酸乙酯部分分离获得了多个糖苷类单体,并利用核磁共振仪对其中4个单体结构进行了鉴定,分别为7,8-氢-3-氧代-a-紫罗兰醇-β-D-吡喃葡萄糖苷（化合物1）,3-氧代-a-紫罗兰醇-β-D-吡喃葡萄糖苷（化合物2）,异嗪皮啶6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（化合物3）,东莨菪苷（化合物4）.
关键词：烟草；糖苷；分离纯化；DPPH；结构鉴定
中图分类号：TS41+1 文章编号：1007-51 19（2017）05-0087-06 DOI：10.13496/j.issn.1007-51 19.2017.05.015
糖苷是烟草中重要的潜香物质,由单糖或低聚糖的半缩醛羟基和另一分子中的羟基、氨基、硫羟基等失水而产生的化合物.烟草糖苷不具有明显的挥发性和香味特征,但在经过高温加热或燃烧时释放香气香味,是影响烟叶香气的重要因素.因分离难度大,难以获得单体化合物,烟草中糖苷类物质一直是研究的重点和难点.从烟草中分离鉴定糖苷类香气前体的工作已经开展了一些,主要集中在20世纪70年代中期至80年代初,其单体结构的分离鉴定也为烟草香气的形成机理提供了新见解.此外,在多种植物化学成分的研究中,很早就发现糖苷类成分具有较好的体外抗氧化活性,但烟草糖苷类成分的抗氧化活性鲜有研究.确定烟草糖苷类等成分的清除自由基能力和抗氧化活性,对于降低卷烟的危害性具有一定的现实意义.本研究采用天然产物分离方法,通过测定烟草粗糖苷不同极性萃取物对1,1-二 -2-三硝基苯肼（DPPH）的清除能力来评估其抗氧化活性,并对活性较好部分进行系统分离鉴定,为烟草糖苷抗氧化活性研究及烟草综合开发利用提供依据.
1材料和方法
1.1仪器和材料
Inova400核磁共振仪,TMS内标；ESI-MS由Waters Xevo-QTOF质谱仪测定；柱色谱硅胶和薄层色谱硅胶（青岛海洋化工厂）；反相材料RP-18（40-63 um）（Merck）；Amberlite XAD-2大孔吸附树脂（sigma）；凝胶柱填料为sephadex LH-20（25-100μm）（AmershamBiosciences）；半制备液相色谱（Waters 1525型）,流动相为甲醇：去离子水；UV-2501PC紫外可见分光光度计（日本SHIMADZU）；XT-4双目显微熔点测定仪（北京泰克仪器有限公司）；化学试剂均为分析纯,半制备系统采用色谱纯级别（Merck）；糖苷显色剂为5%a-萘酚甲醇溶液；维生素c（VC,天津市大茂化学试剂厂）；DPPH（上海麦克林公司）.烟叶材料：烟叶均为贵州产区烤烟.
1.2方法
1.2.1提取样品的制备 取烤烟烟叶2.2 kg,粉碎至20-40目,加入3倍重量的95%乙醇溶液,加热回流提取3次,每次4h,合并提取液后浓缩蒸干,加适量甲醇溶解,趁热抽滤得到深红色液体,滤液再次减压浓缩,得浸膏436 g.浸膏加水悬浊,用石油醚多次萃取,合并萃取液并减压浓缩,得石油醚萃取层27.25 g,計算得率为6.25%.再依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取,得乙酸乙酯萃取层28.14 g和正丁醇萃取层70.85 g,得率依次为6.45%和16.25%,收集水层.
1.2.2粗糖苷成分的富集及检测 乙酸乙酯部分溶液通过Amberlite XAD-2大孔树脂柱,依次用去离子水和不同浓度乙醇水溶剂逐级洗脱,收集中间段洗脱物,减压蒸干,通过薄层层析（TLC）检测,经a-萘酚浓硫酸溶液喷洒后加热显色反应,检测出含有糖苷成分的粗分段组分,合并相似组分得糖苷类粗成分.
1.2.3抗氧化活性研究 抗氧化活性检测参考文献方法.（1）DPPH储备液的配制：准确称取1,1-二 -2-三硝基苯肼（DPPH）0.078g,用无水乙醇溶解定容至100 mL棕色容量瓶中,摇匀,得浓度为2.0 mmol/L母液,4℃保存备用.（2）VC溶液的配制：准确称取VC 0.25 g,水溶解得母液浓度2.5mg/mL,分别取母液0.01、0.02、0.03、0.05、0.08、0.10和0.15mL定容至25mL容量瓶中,得浓度梯度0.001、0.002、0.003、0.005、0.008、0.010和0.015mg/L溶液,室温放置备用.（3）供试品溶液配制：将各萃取层浸膏用无水乙醇溶解,按一定浓度梯度依次稀释备用.（4）自由基清除率测定方法：参照文献1131方法,取2 mL不同浓度供试品溶液和2 mL浓度为0.2 mmol/LDPPH溶液加入比色管中,混匀后室温避光放置30 min,于5 17 nin处测定吸光度值（A值）,平行测定3次,以VC为阳性对照.利用DPPH溶液的特征紫红色基团的吸收,用紫外一可见分光光度法测定反应后的供试溶液在517 nm吸收的下降程度,表示其对有机自由基的清除能力.按照公式和回归方程分别计算自由基清除率和半数清除率（IC50）.
DPPH清除率等于1-（Ai-Aj）/A0
Ai为样品FDPPH吸光度的平均值；Aj为样品溶液吸光度的平均值；A0为DPPH吸光度的平均值.
1.2.4化合物分离和富集 取烟草乙醇提取物中乙酸乙酯萃取段浸膏（28.14 g）用Amberlite XAD-2大孔树脂柱色谱粗分,经水一乙醇（1：0-0：l,V：功梯度洗脱,TLC检测分段为9个部分（Fr.1-9）,将其中的Ft.2段通过凝胶柱（LH-20）层析后,进样至半制备色谱系统中进行分离,在流动相为37%甲醇一水溶剂条件下,保留时间为12 min时获得化合物1（34 mg）；Ft.5段通过RP-18反相硅胶柱层析,流动相为甲醇-水（1：9～10：0,V：V）,通过TLC检测合并后分段为6段（PE.1-6）,其中PE.3部分经过凝胶柱（LH-20）层析后,经过HPLC系统分离,在37%乙腈一水流动相条件下,在保留时间为12 min和14 min分别获得化合物2（36 mg）和3（41 mg）；Fr.6段通过正相硅胶柱层析（流动相为石油醚一丙酮5：1,V：V）后,TLC检测含有糖苷类物质的样品段,进样至半制备色谱系统中进行分离,在流动相为19%乙腈一水溶剂条件下,保留时间为9 min时获得化合物4（24mg）.
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参考文献：
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