论文湖北地区烟草青枯菌系统发育分析是关于本文可作为相关专业烟草论文写作研究的大学硕士与本科毕业论文烟草论文开题报告范文和职称论文参考文献资料。
摘 要：本研究采用青枯菌演化型分类框架,对来源于湖北烟区的48个烟草青枯菌进行系统发育学分析并进行序列变种鉴定,以明确该地区烟草青枯菌的菌系分化.基于青枯菌内切葡聚糖酶基因（egl）和DNA蛋白修复基因（mutS）的系统发育学分析结果表明,48个供试菌株属于青枯菌亚洲分支（演化型Ⅰ）的3个序列变种,分别为序列变种15、17和44,未发现我国已报道的烟草青枯菌序列变种34.其中序列变种17和44为优势菌系,且均来源于恩施地区；序列变种15只包含来源于十堰地区的3个菌株.本研究表明湖北地区烟草上的青枯菌存在一定程度的遗传分化.
关键词：烟草；青枯菌；序列变种；内切葡聚糖酶基因；DNA修复蛋白基因
中图分类号：S572.08文章编号：1007-5119（2015）02-0081-06DOI：10.13496/j.issn.1007-5119.2015.02.015
Abstract：For further details physiological specialization of Ralstonia solanacearum strains isolated from Hubei Province, 48R.solanacearum strains of tobacco were analyzed using the phylotype classification schemes. Phylogenetic analysis of endoglucanase gene（egl） and DNA miatch repair protein gene（mutS） sequences showed that all isolates belonged to phylotypeⅠ, including 3 different sequevars15,17 and 44. 19 strains were belonged to sequevar 17 and 26 strains were belonged to sequevar 44, Only 3 strains were identified as sequevar15. R.solanacearum strains of tobacco from Hubei Province had genentic differentiation of sequevar level.
Keywords：tobacco； Ralstonia solanacearum； sequevar； egl； mutS
烟草青枯病是由青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的危害世界烟叶生产的重要土传病害,1864年在印度尼西亚首次报道了青枯菌对烟草的毁灭性危害[1].1940年前后,该病在美国的北卡罗来纳州猖獗危害,此后,又逐渐成为日本、澳大利亚、韩国等许多产烟国家烟草上重要病害[2].烟草青枯病在我国长江流域及其以南烟区普遍发生,其中尤以福建、贵州、云南、湖南及广西烟区危害最为严重[3].近年来,该病逐渐向北方烟区扩展蔓延,辽宁、河南及陕西等省均有该病发生的报道[4-5].
传统的分类框架是根据青枯菌的寄主范围或对3种双糖和3种己醇的利用能力将其划分为5个生理小种（race1,2,3,4和5）或6个生化型（biovarⅠ,ⅡA,ⅡT,Ⅲ,Ⅳ和Ⅴ）[6-7].2005年,Fegan等[8]提出了新的青枯菌划分框架,将青枯菌依次划分为种（Species）、演化型（Phylotype）、序列变种（Sequevar）和克隆（Clone）4个分类水平,并分别建立了与之相对应的鉴定方法.其中演化型的划分与青枯菌地理起源紧密相关,即演化型Ⅰ、Ⅱ、 Ⅲ和Ⅳ.基于青枯菌内切葡聚糖酶基因（egl）和DNA修复蛋白基因（mutS）,每一个演化型又可划分为不同的序列变种,目前青枯菌已划分出53个序列变种[9-10].
我国对烟草青枯病菌菌系的研究大多以传统的生理小种和生化型测定为主,而应用最新的演化型分类框架对烟草青枯菌的菌系分化研究较少.郑向华等[11]采用RAPD法对广东省烟草青枯病菌的遗传多样性进行了研究；Xu等[12]和潘哲超等[13]采用演化型分类框架对福建及贵州等地的62个烟草青枯菌菌株进行了系统发育分析.近年来,随着湖北烟草生产的不断发展,烟草青枯病的发生也日趋严重,本研究在湖北恩施地区的烟草青枯菌进行了生理分化研究的基础上[14],采用国际最新的青枯菌演化型分类框架,对湖北省青枯病危害较重烟区的烟草青枯菌进行系统发育学分析并进行序列变种鉴定,为湖北地区青枯病的防控工作及烟草的抗青枯病育种提供理论基础.
1 材料与方法
1.1 供试菌株
2013年和2014年分别从湖北省恩施州和十堰市的12个种烟乡镇采集分离烟草青枯菌株,共获得48个烟草青枯菌株.供试菌株和参考菌株见表1.
1.2供试菌株egl基因的扩增
选用MiniBEST Bacterial Genomic DNA Extraction试剂盒（ver3.0,大连宝生物工程有限公司）提取48个供试菌株基因组DNA,以此DNA为模板,对供试菌株的egl基因进行PCR扩增.
用于扩增内切葡聚糖酶（egl）基因的引物为：Endo-F（5"-ATGCATGCCGCTGGTCGCCGC-3）和Endo-R（5"-GCGTTGCCCGGCACGAACACC-3"）[15].PCR扩增采用25 μL反应体系,其中包括2×Es Taq MasterMix 12.5 μL,引物Endo-F和Endo-R各1 μL,DNA 50ng,RNase-Free水补足25 μL.反应程序为96 ℃ 9 min；95 ℃ 1 min,64 ℃ 1 min和72 ℃
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参考文献：
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