论文烟草脉带花叶病毒云南分离物全基因序列分析是关于对不知道怎么写花叶病论文范文课题研究的大学硕士、相关本科毕业论文烟草花叶病特效药论文开题报告范文和文献综述及职称论文的作为参考文献资料下载。
摘 要：应用电子显微镜负染色法在烟草叶片斑驳、脉间褪绿病样中观察到马铃薯Y病毒属病毒粒子,通过马铃薯Y病毒属兼并引物扩增获得目的片段,序列分析表明病样中病原物为TVBMV,命名为YN-YX-TVBMV.根据GenBank已知序列,分别合成引物,对YN-YX-TVBMV进行克隆及测序,得到一条6047 bp的不完整的病毒基因组核苷酸序列,将该序列和国内报道的TVBMV全基因序列进行对 析发现该分离物和报道的TVBMV其他分离物具有明显的地域分布差异,即云南获得的分离物均独立聚为一簇.
关键词：烟草脉带花叶病毒；全基因；分析
中图分类号：S572.01 文章编号：1007-5119（2015）05-0044-03 DOI：10.13496/j.issn.1007-5119.2015.05.008
Abstract： The virus was first observed from Potyvirus with electron microscope. The virus was then identified as TVBMV by RT-PCR using primers M4 and Sprimers. The primers were designed using the genomic sequence of the 3’ end of Potyvirus. The isolate was named YN-YX-TVBMV. A 6047 bp sequence was obtained from eight segments of YN-YX-TVBMV, This sequence was used to compare with TVBMV isolates from China. The results indicated that significant sequence variation existed among TVBMV isolates from diferent locations with the isolates from Yunnan Province always formed a separate group.
Keywords： TVBMV； complete genomic sequence； analysis
烟草脉带花叶病毒（Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV）是马铃薯Y病毒科（Potyviridae）马铃薯Y病毒属（Potyvirus）的一个确定种,以蚜虫非持久性传播,也可以通过机械接种传播[1].2004—2006年Tian等[2]对中国四大烟草主产区的烟草病毒病进行了调查,结果显示,TVBMV中国分离物中,云南分离物和其他中国分离物具有明显的遗传多样性差异；2011年Zhang等[3]再次对40个TVBMV分离物进行全基因序列分析,也发现了中国大陆的TVBMV分离物之间存在频繁的基因交流,且云南的分离物单独聚为一只,分为一组,组内也存在频繁的基因交流.2013年,本实验室得到一个采自云南玉溪
的TVBMV样品,于是对该样品进行了系统鉴定和全基因序列测定分析,现将实验结果报道如下.
1 材料和方法
1.1 材料
样品于2013年8月采自云南省玉溪市研和田间,品种为云烟87,病样典型症状为叶片斑驳、沿支脉绿岛、脉间褪绿、叶片轻微皱缩（图1）.
1.2方法
1.2.1 电镜负染色观察 取少量感病材料用刀将叶片切碎,加入少量3%戊二醛固定,将铜网放在样品汁液上吸附3～5 min,取出吸附有病毒汁液的铜网,用滤纸吸干后,将吸附有样品的一面朝上放置,风干1 min,再放入2%钼酸铵（pH 5.5）中染色5 min,晾干后置于透射电子显微镜下观察.
1.2.2 分子生物学 （1）马铃薯Y属病毒鉴定：采用氯化锂沉淀法提取植物总RNA,用M4-T（GTTTTCCCAGTCACGACTTTTTTTTTTTTTT）引物和Promega公司的M-MLV反转录试剂盒对总RNA进行反转录,再取2 L反转录产物用引物M4（GTTTTCCCAGTCACGAC）和Sprimers（GGNAAYAAYAGYGGNCARCC）[4]PCR扩增时50 ℃退火5个循环,再53 ℃退火30个循环.PCR产物应为1800 bp左右,克隆该片段,并测序.（2）TVBMV全基因组序列扩增：采用氯化锂沉淀法提取植物总RNA,用表1中反向引物和Promega公司的M-MLV反转录试剂盒对总RNA进行反转录,取2 L反转录产物用表1中正向引物的引物和反向引物进行PCR扩增,扩增时各对引物的退火温度见表1.克隆符合大小的目的片段,并测序.
2 结 果
2.1 电镜观察结果
应用电子显微镜负染色法,在病原汁液中观察到大小约13×700～900 nm的线状病毒粒子,且只有这一种病毒存在.初步判断为Potyvirus属病毒[5].
2.2 分子生物学结果
2.2.1 马铃薯Y病毒属病毒鉴定结果 Trizol法提取病样总RNA,以M4-T为引物反转录,引物 M4 和 sprimers进行PCR扩增.得到约1800 bp的目的片段,克隆该片段,并测序.测序结果表明,供试样品总RNA中检测到烟草脉带花叶病毒基因序列,该序列和国内报道的YN9.1分离物（GenBank：KF444434.1）同源性 为99%.
2.2.2 TVBMV全基因组序列扩增结果 供试样品总RNA用表1中反向引物和Promega公司的M-MLV反转录试剂盒对总RNA进行反转录,取2 L反转录产物用表1中正向引物和反向引物进行RT-PCR扩增,得到的目片段,克隆和测序.拼接以上序列获得一条6047 bp的不完整的TVBMV基因组序列,命名为YN-YX-TVBMV.使用MEGA 5.0软件将该序列和GenBank中注册的TVBMV全基因序列进行多序列对比,之后采用差异位点距离（p-distance）估计它们的进化距离,结果表明YN-YX-TVBMV和登录号为 KF444434.1的全基因序列进化距离最近（表1）.
总结:本文关于花叶病论文范文,可以做为相关论文参考文献,与写作提纲思路参考。
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