论文饲料中动物源性成分的PCR检测技术进展是关于动物源性成分方面的的相关大学硕士和相关本科毕业论文以及相关动物源性成分论文开题报告范文和职称论文写作参考文献资料下载。
摘 要 饲料安全不仅关系着养殖业的健康发展,更是人类食品安全的基本保证.因此,建立饲料中简便、快速、准确的动物源性成分检测方法刻不容缓.本文简述了PCR技术检测饲料中动物源性成分的原理以及近年来国内外用来检测饲料的动物源性的几种PCR技术,比较了常规PCR技术、多重PCR技术、实时荧光定量PCR等几种检测方法的优缺点,为建立简便、快速、准确的检测方法提供理论基础.
关键词 PCR；饲料；动物源性成分
1前言
食品安全要从源头抓起,饲料安全是动物源性食品安全的基本保证.饲料中非法添加动物源性成分不仅引发动物疫病的传播,更是给人类的食品安全埋下了深深的隐患.上世纪疯牛病的流行给世界饲料工业、养牛业、牛肉及其产品都造成了严重影响和损失,同时本病也严重地威胁着人类的生命和健康.
2PCR技术鉴定饲料动物源性成分的方法原理
饲料加工过程需要高温处理,感官性状、蛋白质成分和其他免疫原性物质会被破坏而难以鉴别.但DNA不同于蛋白质,它不仅能提供更多的信息内容,最重要的是抗热能力强,在各种加工过程中能稳定存在,成为了鉴定物种源性的一个重要依据.1986年美国的KaryMullist等人就利用DNA的聚合酶催化合成反应,首创了体外扩增特异DN段的PCR技术,该技术在1993年获得了诺贝尔奖.PCR技术最早是用来检测食品中的有害微生物.
3几种不同PCR技术在饲料动物源性鉴定中的应用
3.1常规的PCR技术
常规的PCR技术就是通过扩增、凝胶电泳、转化、测序等关键步骤来确认最终结果.PCR能够检测到微量的DNA.利用特异性或通用引物,许多线粒体序列（如细胞色素b）或基因组DNA来分析动物种类.意大利研究者Tartaglia等人第一个报道了用PCR技术检测牛线粒体DN段以检测动物源性饲料中牛源性成分,并对产物进行了测序确证,检测灵敏度可达0.125%；美国的Wang等人也建立了应用PCR技术快速检测动物源性饲料中牛源性成分的方法；Lahiff等建立了一种检测骨粉中羊、猪、鸡的PCR方法,检出底限分别为5%、1%和5%；Botter等通过比较了多种动物的16S线粒体DNA序列,设计了可以同时扩增牛、羊、猪、鸡、马、鱼等多种动物而对植物、昆虫和原核生物没有扩增的通用引物；Dalmasso等曾报道了一对鱼源性成分的检测引物,但Tasara等对该引物的特异性进行评价时发现,该引物与猪源性成分有交叉反应.可扩增猪源性成分.
3.2PCR-RFLP
PCR-RFLP（限制性内切酶多态性分析）
方法是用引物进行扩增,然后对扩增片段用限制性内切酶进行酶切,利用限制性内切酶的多态性进行检测.此方法简单高效,无需设计物种特异性引物,使用适合的通用引物即可,将扩增产物进行限制内切酶反应.通过分析电泳图谱特征来判定物种来源,但该方法适合鉴别单一成分样品,多物种混合物样品由于电泳图谱较为复杂,分析难度较高,结果可靠性较低,而且使用的限制性内切酶对PCR产物进行酶切分析不方便.所以该法在饲料动物源性成分的检测应用中很少,本文不做详细阐述.
3.3多重PCR技术
前面所述的PCR技术一次只能扩增一个目的片段,在饲料中动物源性成分复杂时.必须要对多种成分同时进行检测.随着技术的进步,研究人员开发出了仅需一次PCR反应便可鉴别饲料中多种动物源性成分的多重PCR法,大大节省了检测时间,提高了检测效率,而且能够克服假阳性问题.
4定量PCR在动物源性成分含量检测中的应用
尽管PCR法有诸多优点.但是不能对动物源性成分进行定量分析.实时荧光定量PCR技术（RT-PCR）的出现弥补了这一不足.它是在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,具有特异性强、灵敏度高、定量范围宽、实时检测结果等优点,已被国内外广泛用于包括家禽、家畜、鱼类等物种鉴定以及饲料中动物源性成分的检测].黄士新等2002年建立了RT-PCR测定饲料中的牛羊源性成分的方法.反應体系有很好的稳定性和重复性,尤其是样品含量较低的情况下,检测灵敏度较高.2004年时,黄士新等利用RT-PCR方法对饲料中的牛羊源性成分的检测做了更进一步的研究,并对定量范围进行了检单的讨论.试验表明：方法的重现性较好.采用牛探针检测饲料中的牛成分时,相对偏差<3.5%；采用羊探针检测饲料中的羊成分时.相对偏差<3.0%.在30%-90%的浓度范围内牛探针可以定量检测出饲料中牛成分及其含量.在10%-90%的浓度范围内羊探针可以定量检测出饲料中牛成分及其含量,与常规PCR相比,RT-PCR方法在操作简便性和反应的灵敏度方面都具有更大的优势.
5结语
动物源性成分的检测不仅对于进出口饲料的质量安全监管有重要的作用,对于食品及饲料的“掺杂使假”也有着重要作用.同时更能够防止疯牛病疫区的饲料蔓延至我国,促进我国进出口贸易的正常进行.
目前,我国的国家标准和中国出入境检验检疫局的标准中都采用普通PCR方法对饲料中动物源性成分进行定性检测.但是随着PCR技术的不断发展,实时荧光定量PCR法在操作简便性和反应的灵敏度方面表现出更大的优势,并且能够准确定量,该技术的应用前景将更加广阔.
总结:此文是一篇动物源性成分论文范文,为你的毕业论文写作提供有价值的参考。
参考文献：
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